免疫熒光(IF)是一種定位檢測手段，它不僅能顯示蛋白在細胞內的定位，還能輸出令人驚奇的彩圖。越來越多的期刊將IF圖作為關鍵數據，由此可見IF在科學和美學上的吸引力。細胞免疫熒光(IF-IC)需細胞生長/附著在玻璃載玻片上進行，在進行清洗、固定、破膜和染色時，細胞必須附著足夠牢固。
懸浮細胞固定免疫熒光中的挑戰
由于懸浮細胞不依賴支持物表面生長，其在玻片上的粘附是一大挑戰。傳統離心甩片或涂片法制備的細胞片存在細胞分布不均或固定不牢的問題，影響后續染色和顯微觀察。IF-IC通常不作為懸浮細胞的檢測手段，這是因為懸浮細胞粘附玻片能力的不足仍是一大難題。
一般貼壁細胞粘附在包被的玻片上，但懸浮細胞并不適合，在科學刊物中避免使用懸浮細胞IF-IC的傾向非常明顯。但若您研究某個蛋白在懸浮細胞中的表達，您能將懸浮細胞牢固地粘在蓋玻片上IF-IC嗎？首先，您可使用特殊的離心柱和離心機使細胞粘附在玻片上。您也可以先對懸浮細胞進行固定、破膜、染色和清洗，最后將它們粘附在包被玻片上。這兩種方法都需復雜步驟，對于特定細胞需優化條件。如果能讓懸浮細胞粘附在玻片上，讓它們能像貼壁細胞一樣IF-IC，一直是一個痛點？
懸浮細胞固定免疫熒光玻片解決方案
為克服以上挑戰，靶點科技聯合Shikhar開發出專門的懸浮細胞免疫熒光專用Shi-fix玻片，您只需添加懸浮細胞、無需離心即可將細胞牢固地粘附在玻片，后續可對粘附細胞進行特定刺激。懸浮細胞可在玻片上單層生長，后續可像貼壁細胞般進行IF-IC，顯著簡化實驗流程并提高染色效率。
懸浮細胞固定免疫熒光玻片操作步驟
1. 用PBS清洗收集的懸浮細胞，并用PBS將其重懸為2~5×106/mL濃度的細胞懸液；
2. 為便于操作，將Shi-fix™玻片放在12孔板中。將細胞懸液滴加Shi-fix™玻片上(2~3×105個細胞/玻片)，體積控制在100ul，具體看樣品細胞總量；
3. 將含Shi-fix™玻片的12孔板放在水平臺面上，室溫靜置讓細胞附著20~30分鐘(對于某些類型的細胞，孵育時間越長附著效果越好，但不要超過1小時)；
4. 向含Shi-fix™玻片的12孔板兩側邊緣加入2 mL PBS(不可直接滴到玻片)，輕柔搖動3~5分鐘清洗未粘附的細胞(可放置水平搖床上緩慢搖動)。
5. 顯微鏡檢查細胞附著情況。如需進一步培養，加入1mL培養基；或者直接進行固定、破膜和免疫熒光染色。
懸浮細胞固定免疫熒光玻片數據圖片
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